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蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒
蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒
品牌:原鑫生物
貨號:YX-152875
規格:60T/50S
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蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒

Sucrose Synthase (SS) Activity Assay Kit

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖1

一、蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒產品描述 

蔗糖不僅是重要的光合產物,也是植物體內運輸的主要物質、碳水化合物的貯存形式之一。蔗糖 合成酶(Sucrose Synthase,SS)是植物糖代謝過程的關鍵酶,負責催化蔗糖合成與分解的可逆反應, 其合成活性可催化植物體內游離果糖和葡萄糖生成蔗糖。

蔗糖合成酶催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應生成蔗糖,蔗糖與間苯二酚反應生成有色物 質,產物在 480 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值變化即可表征蔗糖合成酶的活性。

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖2

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖3


二、蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒產品使用說明

測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿、研缽/勻漿器、可調式移 液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養箱和蒸餾水。

1.粗酶液的制備(可根據預實驗結果適當調整樣本量及比例) 

按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清即為粗酶液,置于冰上待測。

2.測定步驟

①分光光度計預熱 30 min 以上,調節波長至 480 nm,蒸餾水調零。

②滅活粗酶液的制備:取適量粗酶液沸水浴處理 5-10 min(密封以防止水分散失),冷卻至室溫 后即為滅活粗酶液,可將待測粗酶液統一進行處理。

③在離心管中依次加入下列試劑:

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖4

充分混勻,25℃準確反應 10 min

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖5

充分混勻,沸水浴處理 10 min(密封以防止水分散失)

冰水浴迅速冷卻至室溫

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖6

吸光值測定(30 min 內完成測定):取 1 mL 反應液至 1 mL 玻璃比色皿中,測定 480 nm 處吸光 值,記為 A 測定、A 對照、A 標準和 A 空白,計算?A 測定=A 測定-A 對照,?A 標準=A 標準-A 空 白。注:空白管只需測定 1-2 次,每個測定管均需設一個對照管。

標準曲線的建立:以 3.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL 為橫坐標(x),以其對應的?A 標準 為縱坐標(y),繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b,將?A 測定帶入公式中得到 x(mg/mL)。

3.蔗糖合成酶(SS)活性計算 

①按組織蛋白濃度計算

單位定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1 μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖7

②按組織樣本質量計算

單位定義:每 g 組織每分鐘催化產生 1 μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒圖8

注釋:V 樣:反應體系中加入粗酶液的體積,0.03 mL;V 提:粗酶液總體積,1 mL;Cpr:樣本 蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,10 min。


三、蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒注意事項 

①若測定吸光值超出標準線性吸光值范圍:高于最高值建議將粗酶液適當稀釋后再進行測定;低 于最低值建議適當增加樣本量重新制備粗酶液后再進行測定,計算時相應修改;

②顯色完成后應在 30 min 內完成測定; ③為保證結果準確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內容為準), 確認試劑儲存和準備是否充分,操作步驟是否清楚,且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定, 過程中問題請您及時與上海原鑫生物科技工作人員聯系。


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