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生化試劑盒 - 酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒說明書

生化試劑盒 - 酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒說明書

Acidic Protease (ACP) Activity Assay Kit

一、酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒產品描述 

酸性蛋白酶(ACP)是在酸性環境下作用于蛋白質肽鍵的一類蛋白酶,可將蛋白質水解為氨基酸、 多肽以及游離氨基酸。酸性蛋白酶能在低 pH 條件下能夠有效水解蛋白質,在酒精發酵、食品加工、 釀造、飼料添加、皮革加工等領域具有廣泛應用。 酸性蛋白酶能夠在酸性條件下,催化酪蛋白水解產生酪氨酸,酪氨酸在堿性條件下能夠還原磷鉬 酸化合物生成鎢藍,產物在 680 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值變化即可表征酸性蛋白酶的活性。


二、酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒產品內容圖示

酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒說明書圖1


三、酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒產品使用說明 

測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿 器、可調式移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養箱和蒸餾水。

  1. 粗酶液的制備(可根據預實驗結果適當調整樣本量及比例)

    ①細菌或細胞:離心收集細菌或細胞至離心管內,按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL) 為(500-1000):1 的比例(建議 500 萬個細菌或細胞加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴超聲破碎(功 率 300 W,超聲 3 s,間隔 7 s,總時間 3 min),4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清置于冰上待測。

    ②組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加 入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 8000 g 離心 10 min,取上清置于冰上待測。 ③血清、培養液等液體樣本:直接測定或使用提取液適當稀釋后再進行測定。

  2. 測定步驟

    ①分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長至 680 nm,蒸餾水調零。

    ②使用前將試劑一、試劑二和試劑三 30℃預熱 30 min。

    ③在離心管中依次加入下列試劑:

    酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒說明書圖2

    吸光值測定:取 200 μL 反應液于微量玻璃比色皿/96 孔板中,測定 680 nm 處吸光值,記為 A 測 定、A 對照、A 標準和 A 空白;計算?A 測定=A 測定-A 對照,?A 標準=A 標準-A 空白。注:標準管 和空白管只需測定 1-2 次,每個測定管均需設立一個對照管。

  3. .酸性蛋白酶(ACP)活性計算

    酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒說明書圖3

    酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒說明書圖4

    注釋:C 標準:酪氨酸標準應用液濃度,0.25 μmol/mL;V 樣:反應體系中加入粗酶液的體積, 0.02 mL;V 提:粗酶液總體積,1 mL;V 酶促:酶促反應總體積,0.1 mL;Cpr:粗酶液蛋白濃度, mg/mL;W:樣品質量,g;T:催化反應時間,10 min。


四、酸性蛋白酶(ACP)活性檢測試劑盒注意事項 

①若?A 測定差值較小,可適當延長第一步反應時間(15-25 min),計算時相應修改; 

②為保證結果準確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內容為準), 確認試劑儲存和準備是否充分,操作步驟是否清楚,且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定, 過程中問題請您及時與工作人員聯系。


文章來源:http://www.www.ukongfit.cn/newss-137.html

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